Gélose TSN

Le milieu TSN est une gélose sélective, elle exploite le fait que Clostridium perfringens est résistant à la polymyxine, la néomycine (antibiotiques) et qu’il a le pouvoir de réduire les sulfites. La croissance des autres Clostridia sulfito réducteurs est presque totalement inhibée car la flore d’accompagnement est largement supprimée. Ce milieu contient 1 critère de différenciation : le sulfite de sodium dont la réduction est révélée par le fer (précipitation du sulfure de fer), forme une colonie noire. La température d’incubation permet de sélectionner : - à 37 °C → dénombrement des formes végétatives de Cl. perfringens. - à 46 °C → dénombrement de Clostridium perfringens. L’incubation se fait en anaérobiose.

Ensemencement

-se placer en milieu stérile : hotte ou bec Bunsen

-réaliser la dilution nécessaire en eau physiologique ou dans du tampon PBS

-introduire 1 ml de la suspension bactérienne dans une boîte de Petri stérile

-ajouter 15 ml de gélose en surfusion (46 °C)

-laisser la gélose se solidifier

-couler une double couche (10 ml de gélose)

-placer la boîte de Petri dans une jarre hermétiquement fermée contenant un réactif générateur d'une atmosphère anaérobie (acide ascorbique par exemple) et un témoin de cette atmosphère modifiée

-incuber la jarre à 37 ou 46 °C pendant 18 à 24 heures

Les colonies produisant un pigment noir diffusible sont des bactéries anaérobies sulfito réductrices et peut-être Clostridium perfringens.