Fractionnement cellulaire

L'ultracentrifugation différentielle consiste en une série d'ultracentrifugations à des vitesses croissantes qui séparent les composants en fonction de leur vitesse de sédimentation. Les particules les plus lourdes et les plus denses se déposent au fond du tube, formant le culot, à un rythme dépendant de leur taille et de leur densité[6]. Le surnageant est ensuite recueilli et soumis à une ultracentrifugation supplémentaire, cette fois à une vitesse plus élevée. Le processus peut être répété plusieurs fois en fonction du type de cellule et des structures à isoler[3].

L'ultracentrifugation en gradient de densité est basée sur la sédimentation des composants cellulaires dans un gradient de densité[2], composé de solutions de densités différentes (saccharose, ficoll, etc.). Le tube est mis en rotation pendant une période assez longue pour permettre à chaque élément de migrer vers le liquide où il trouve une position d'équilibre par égalité des densités. Par conséquent, dans ce processus, seule la densité détermine la séparation et non la taille et la forme des particules[3]. Après ultracentrifugation, les fractions peuvent être collectées individuellement pour une analyse complémentaire et la détermination de l'efficacité de séparation.

L'ultracentrifugation en gradient de densité peut être subdivisée en deux types principaux : la séparation zonale et la séparation isopicyclique. La principale différence entre les deux est que, en séparation isopicyclique, un gradient de densité élevée est utilisé et les cellules ne sont séparées que par des différences de densité. En séparation zonale, un gradient de densité plus faible est utilisé et les cellules sont principalement séparées par des différences de taille[7].