Dosage du glucose par le DNS
Le dosage du glucose par le DNS est un dosage colorimétrique du glucose.
Principe
On utilise les propriétés réductrices du glucose. à chaud et en milieu alcalin, il y a réduction de l'acide 3,5-dinitrosalicylique ou DNS (aussi appelé acide 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoïque) qui joue le rÎle d'oxydant, le glucose étant le réducteur.
- Réaction de réduction de l'acide 3,5-dinitrosalicylique en acide 3-amino-5-nitrosalicylique (aussi appelé acide 3-amino-2-hydroxy-5-nitrobenzoïque) :
- Le glucose, quant à lui, est oxydé en divers produits d'oxydation :
- Glc â produits d'oxydation + neâ
L'acide 3-amino-5-nitrosalicylique est un composĂ© rouge. Cette rĂ©action n'est pas stĆchiomĂ©trique : il n'y a pas de bilan d'oxydorĂ©duction. L'intensitĂ© de la coloration rouge est proportionnelle Ă la concentration de l'ose si l'on opĂšre dans des conditions physico-chimiques constantes. Les droites d'Ă©talonnage ne passent pas toujours par l'origine.
Cette méthode n'est pas applicable au dosage d'un mélange complexe de glucides réducteurs.
Protocole
Matériel
- SpectrophotomĂštre et ses cuves
- Tubes à essai lavés et secs
- Pipette automatique
- BĂ©chers
- Fioles jaugées
- Burette
- Centrifugeuse Ă deux principes
Solutions
- Solution de glucose Ă 0,005 mol/L
- Solution de DNS (pour 100 mL)
- 1g d'acide 3,5-dinitrosalicylique
- 20mL de solution de NaOH 2M
- 30g de tartrate de sodium-potassium tetrahydraté
- eau distillée q.s.p. 100mL
- Eau distillée
- Solution Ă doser
Préparation de la gamme d'étalonnage
Dans une série de tubes :
- introduire 0 - 0,2 - 0,4 - 0,6 - 0,9 - 1,2 ml de solution de glucose Ă 0,005 mol/L ;
- ajuster chaque tube à 1,5 ml avec de l'eau distillée ;
- ajouter 1 ml de réactif 3-5 DNS ;
- mélanger et boucher les tubes avec du coton cardé et du papier aluminium ;
- porter au bain-marie à 100 °C pendant 5 min exactement ;
- refroidir et ajouter 7,5 ml (q.s.p. 10 ml) d'eau distillĂ©e dans chaque tube (on suppose que l'Ă©vaporation est la mĂȘme pour chaque tube), homogĂ©nĂ©iser et laisser reposer pendant 15 min.
Lire les absorbances Ă 540 nm contre le blanc (tube no 0).
Essais
Ils sont Ă traiter dans les mĂȘmes conditions opĂ©ratoires.
Réaliser le dosage avec des prises d'essais de 0,5 ml diluées convenablement, additionnées d'1 ml d'eau distillée et d'1 ml de DNS.
| N° de tube | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Solution Ă©talon de glucose Ă 0,005 mol/L en mL | 0 | 0,2 | 0,4 | 0,6 | 0,9 | 1,2 |
| Eau distillée en mL (avant chauffage) | 1,5 | 1,3 | 1,1 | 0,9 | 0,6 | 0,3 |
| DNS en mL | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
| Eau distillée en mL (aprÚs chauffage) | 7,5 | 7,5 | 7,5 | 7,5 | 7,5 | 7,5 |
| Quantité de glucose en ”mol | 0 | 1,0 | 2,0 | 3,0 | 4,5 | 6,0 |
Ce tableau reprĂ©sente ce qui doit ĂȘtre mis dans chaque tube et en quelle quantitĂ©.